乳酸是手性的并且具有兩種光學(xué)異構體：L-乳酸和D-乳酸。 在代謝和運動(dòng)過(guò)程中，乳酸鹽通過(guò)乳酸脫氫酶（LDH）不斷從丙酮酸產(chǎn)生。 監測乳酸水平是評估組織需氧量和利用率之間平衡的好方法，在研究細胞和動(dòng)物生理學(xué)時(shí)非常有用。 D-乳酸不被哺乳動(dòng)物代謝，其從體內消除主要取決于腎臟排泄。 D-和L-乳酸存在于許多發(fā)酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉類(lèi)和魚(yú)類(lèi)。 D-和L-乳酸含量是食品的質(zhì)量指標，如雞蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。 血液中異常高濃度的D-乳酸通常是胃腸道中細菌過(guò)度生長(cháng)的反映。

Amplite 熒光法D-乳酸檢測試劑盒用于檢測L-乳酸鹽或D-乳酸鹽。 生物樣品，如血清，血漿，尿液，以及細胞培養樣品。 在酶偶聯(lián)測定中，乳酸與NADH成比例相關(guān)，其通過(guò)熒光NADH傳感器特異性監測。 可以通過(guò)熒光酶標儀在Ex / Em = 540nm / 590nm下讀取信號。 使用這種Fluorimetric Amplite D-Lactate Assay Kit，我們能夠在100μL反應體積中檢測到少至1.4μM的D-乳酸。 它應用廣泛，可以很容易地適用于需要測量D-乳酸的各種應用。

操作方法

1.準備N(xiāo)AD儲備溶液（100X）：

向NAD小瓶（組分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD儲備溶液。

2.準備D-乳酸儲備液：

將200μLH2 O或1×PBS緩沖液加入到D-乳酸鹽標準品（組分D）的小瓶中以制備100mM D-乳酸鹽標準溶液。

注意：未使用的D-lacate標準儲備溶液應分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

3.準備D-乳酸標準品（0至1 mM）的連續稀釋液：

3.1將10μLD-乳酸儲備溶液（來(lái)自步驟2）加入990L 1x PBS緩沖液中以產(chǎn)生1mM D-乳酸鹽標準溶液。

注意：稀釋的D-乳酸標準溶液不穩定，應在4小時(shí)內使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸標準溶液進(jìn)行1：3連續稀釋?zhuān)玫?00,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸標準品系列稀釋液。

3.3如說(shuō)明書(shū)中的表1和2中所述，將含有D-乳酸鹽標準品和含D-乳酸鹽的測試樣品的系列稀釋液加入到固體黑色96孔微量培養板中。

4.準備D-乳酸測定混合物：

4.1將5 mL測定緩沖液（組分B）加入一瓶酶混合物（組分A）中。

4.2將50μLNAD儲備液（100X，來(lái)自步驟1）加入組分A（來(lái)自步驟4.1）的瓶中，并且要混合均勻。

注意：這種D-乳酸測定混合物足以用于一個(gè)96孔板。未使用的D-乳酸測定混合物應分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

5.運行D-乳酸測定：

5.1將50μLD-乳酸測定混合物（來(lái)自步驟4.2）添加到D-乳酸標準品，空白對照和測試樣品（參見(jiàn)步驟3.3）的每個(gè)孔中，以使總D-乳酸測定體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLD-乳酸測定混合物。

5.2在室溫下孵育反應30分鐘至2小時(shí)，避光。

5.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的熒光板讀數器監測熒光增加（最佳Ex / Em = 540 / 590nm，在570nm處截止）