Cell Meter Annexin V凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 適合流式細胞檢測 通過(guò)對磷脂酰絲氨酸(PS)進(jìn)行檢測，而實(shí)現細胞凋亡的檢測。在凋亡細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）從胞內移位到胞外表面，因此PS出現在細胞的外表面可以作為細胞凋亡的起始或者中間階段的通用指示器，也可以通過(guò)其形態(tài)學(xué)改變來(lái)測定。該試劑盒采用獨有的綠色熒光染料（FITC的優(yōu)越替代物，使用FITC通道檢測）標記的Annexin V檢測凋亡細胞，同時(shí)包含PI紅色熒光染料用于對壞死細胞進(jìn)行染色。試劑盒內組分經(jīng)過(guò)特別優(yōu)化，尤其適合于流式細胞分析。目前商業(yè)化各種Annexin V凋亡檢測試劑盒一般是將Annexin V進(jìn)行傳統的熒光團（FITC、Cy3）標記后作為熒光探針，通過(guò)檢測細胞凋亡早期細胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS），從而實(shí)現對細胞凋亡的檢測。然而目前的檢測受到熒光顏色、熒光強度和檢測靈敏度等因素的限制。Cell Meter Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit系列產(chǎn)品分別采用了mFluor Violet和iFluor熒光染料，這種染料比傳統的FITC、Cy3等具有更高的熒光強度、更低的熒光背景和更優(yōu)秀的光穩定性，因此檢測效果更靈敏穩定；而iFluor系列染料在保證上述優(yōu)勢的同時(shí)，均在405nm處激發(fā)，尤其適合用于多色分析。

操作步驟

1.用測試化合物處理細胞一段時(shí)間（用喜樹(shù)堿處理的Jurkat細胞4-6小時(shí)）以誘導細胞凋亡。

2.離心細胞，得到1-5×10⁵個(gè)細胞/管。

3.將細胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。

4.將2μL膜聯(lián)蛋白V-iFluor 488（組分A）加入細胞中。

5.可選：加入2μL100X碘化丙啶（成分C）用于壞死細胞。

6.在室溫下孵育30至60分鐘，避光。

7.可選：在使用流式細胞儀分析細胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。

8.使用具有FL1通道的流式細胞儀（Ex / Em = 490 / 525nm）監測膜聯(lián)蛋白V-iFluor 488的熒光強度。當碘化丙啶加入細胞時(shí)，使用FL2通道測量細胞活力。