Cell Meter磷脂酰絲氨酸凋亡檢測試劑盒 *紅色熒光,適合微孔板檢測*是通過(guò)檢測PS的翻轉來(lái)測定細胞凋亡。在凋亡細胞中，PS從胞內移位到胞外表面，因此PS出現在細胞的外表面可以作為細胞凋亡的起始或者中間階段的通用指示器，也可以通過(guò)其形態(tài)學(xué)改變來(lái)測定。該試劑盒使用我們獨有的紅色熒光Apopxin PS傳感器特異性的結合PS，其親和性高于A(yíng)nnexin V(Kd<10nM)。該試劑盒使用的PS傳感器結合膜上的PS后，發(fā)出紅色的熒光。因為與PS的高親和性，該試劑盒比其它基于A(yíng)nnexin-V，僅能用熒光顯微鏡和流式檢測凋亡的試劑盒更穩定，并且本試劑盒除上述兩種儀器外還能使用熒光酶標儀。

溶液配制

工作溶液配制

將10 μL Apopxin?Red（組分A）加入1 mL的測定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Apopxin?Red工作溶液。

操作步驟

1.通過(guò)向PBS或所需的緩沖液中加入10X /孔（96孔板）或2.5 μL /孔（384孔板）的10X測試化合物儲備溶液來(lái)處理細胞。 對于空白孔（不含細胞的培養基），添加相同量的化合物緩沖液。

2.將細胞板在5％CO2、37°C的培養箱中孵育所需的時(shí)間（對于喜樹(shù)堿處理過(guò)的Jurkat細胞，需要4-6小時(shí)）以誘導凋亡。

3.在每個(gè)孔中加入100 μL /孔（96孔板）或25 μL /孔（384孔板）的Apopxin?Red工作溶液。

4.在避光條件下，于室溫下孵育細胞板至少1小時(shí)。

5.以800 rpm的速度離心細胞板（特別是非粘附細胞）2分鐘（制動(dòng)）。

6.使用熒光酶標儀（Ext / Em = 590/630 nm（截止= 610 nm））或使用帶有TexasRed?濾光片的熒光顯微鏡對圖像池進(jìn)行熒光強度監測。